Análise proteômica comparativa durante a maturação de culturas embriogênicas de Araucaria angustifolia

Autores

  • Julia Bolanho da Rosa Andrade
  • Leonardo Lucas Carnevalli Dias
  • Tiago Santana Balbuena
  • Claudete Santa-Catarina
  • Eny Iochevet Segal Floh
  • Vanildo Silveira

DOI:

https://doi.org/10.14295/oh.v13i0.1873

Palavras-chave:

Araucaria angustifolia, proteômica, eletroforese bidimensional, embriogênese somática, ácido abscísico.

Resumo

A evolução morfogenética dos embriões, durante a embriogênese em plantas, é acompanhada por uma intensa síntese de proteínas LEAs (proteínas da embriogênese tardia) e proteínas de reserva que possuem papel fundamental durante a fase de maturação. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do ABA e dos agentes osmóticos, polietilenoglicol (PEG) e maltose, na expressão diferencial de proteínas durante a maturação de culturas embriogênicas de A. angustifolia. Culturas embriogênicas de A. angustifolia foram submetidas a cinco tratamentos de maturação: 1) Controle, meio de cultura BM; 2) ABA, meio BM suplementado com ABA (200 µM); 3) PEG, meio BM suplementado com PEG (9%); 4) Maltose, meio BM suplementado com maltose (9%) e; 5) APM, meio BM suplementado com ABA (200 µM), PEG (9%) e maltose (9%). Após 60 dias de cultivo as proteínas totais foram extraídas com tampão uréia:tiouréia (7M:2M), seguido de precipitação em 10% ácido tricloroacético (TCA)/acetona. Alíquotas de 120 µg de proteínas foram isofocalizadas em tiras de gel IPG (gradiente imobilizado de pH) de 11 cm e faixa de pH 4-7, sendo posteriormente submetidas à separação eletroforética em gel de poliacrilamida SDSPAGE 12%. As proteínas foram visualizadas pela coloração com prata e os géis analisados através do programa Image Master 2-D Platinum®. O tratamento PEG resultou na expressão de maior número de proteínas (420 polipeptídeos), enquanto a adição de ABA apresentou 164 polipeptídeos. Os demais tratamentos: Controle, Maltose e APM apresentaram, respectivamente, 347, 322 e 273 polipeptídeos. Todos os tratamentos apresentaram predominância de proteínas com peso molecular entre 30 kDa e 60 kDa. O tratamento suplementado com Maltose apresentou maior porcentagem de polipeptídeos de alto peso molecular (31,4%) quando comparado com os demais tratamentos. A identificação das proteínas expressas diferencialmente pode contribuir para a compreensão do desenvolvimento embrionário, além de auxiliar na otimização dos protocolos de maturação das culturas embriogênicas em A. angustifolia. (FAPESP, CNPq)

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Publicado

2007-06-14

Edição

Seção

Artigos